糖化血清蛋白（GSP）含量檢測(cè)試劑盒（NBT法）說明書

微量法

貨號(hào)：BC494

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入0.8 mL試劑二，充分溶解，配制成10 mmol/L DMF標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存4周；取20µL 10 mmol/L DMF標(biāo)準(zhǔn)液和30µL試劑二混合配制成4 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。

產(chǎn)品說明：

血清葡萄糖與白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)，形成高分子酮胺結(jié)構(gòu)，在堿性條件下與硝基四氯唑藍(lán)反應(yīng)，生成紫紅色化合物甲臜。在530nm波長處比色，測(cè)定其OD值，與DMF標(biāo)準(zhǔn)比較，即可求得其含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

血清（漿）：收集血清（漿）到離心管內(nèi)，按照血清（漿）體積（mL）∶試劑一體積（mL）= 10∶1的比例（建議吸取0.2 mL血清（漿）于EP管中，加入0.02 mL試劑一），充分混勻，于37℃保溫30 min。

二、測(cè)定步驟

1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液：按照標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）∶試劑一體積（mL）= 10∶1的比例（建議吸取0.2 mL 4 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液于EP管中，加入0.02 mL試劑一），充分混勻，于37℃保溫30 min。

3、 按下表步驟加樣：

注：空白管和標(biāo)準(zhǔn)空白管均只需做1-2次。

三、糖化血清蛋白含量計(jì)算

糖化血清蛋白含量（mmol/L）=C×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F=4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F

C：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，4 mmol/L；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1、顯色完成后，應(yīng)立即加入試劑四；建議一次性不要做太多樣本，防止試劑四加入不及時(shí)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果受到影響。

2、如果測(cè)定吸光值A＞1.5或ΔA＞1，建議稀釋樣本后再測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果測(cè)定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加操作表中的樣本量后再進(jìn)行測(cè)定（空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管需要增加至相同體積量）。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 取0.2 mL小鼠血清加入0.02 mL試劑一，充分混勻，于37℃保溫30 min。標(biāo)準(zhǔn)溶液處理同上。按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)定計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.252-0.044=0.208，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.227-0.101=0.126，按公式計(jì)算小鼠血清中糖化血清蛋白含量：
糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=4×0.208÷0.126=6.603 mmol/L。

2、 取0.2 mL馬血清加入0.02 mL試劑一，充分混勻，于37℃保溫30 min。標(biāo)準(zhǔn)溶液處理同上。按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)定計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.1-0.044=0.056，測(cè)定ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.227-0.101=0.126，按公式計(jì)算血清中糖化血清蛋白含量：
糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=4×0.056÷0.126=1.778 mmol/L。

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