北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC3970-50T/24S
更新時間：2024-04-12
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：911
010-50973130
產品分類
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土壤谷氨*胺酶（S-GLS）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3970
規(guī)格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三A | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑三B | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體5 mL×1瓶 | 常溫保存 |
| 標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶加入6 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周；
試劑三：臨用前根據樣本量按比例（A:B=1:4）配制，現配現用；若發(fā)現變色后則不能再使用；
標準品：10 µmol/mL氮標準液。取8μL 10µmol/mL氮標準液，加入1016μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.078μmol/mL的標準液待測。（實驗中每管需要400μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
產品說明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些細菌以及植物根中，催化谷氨*胺水解成谷*酸和氨，在氮素代謝中具有重要調控作用，尤其是調節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
S-GLS催化谷氨*胺水解成L-谷*酸和氨，利用靛酚藍比色法測定氨增加的速率，即可計算其酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至630nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
| 風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 甲苯（μL） | 50 | 50 | - | - |
| 充分震蕩后常溫靜置10min。 | - | - | ||
| 試劑一（μL） | 550 | 550 | - | - |
| 試劑二（μL） | 400 | - | - | - |
| 蒸餾水 | - | 400 | - | 400 |
| 充分混勻，37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h。10000g常溫離心10 min，取上清液待測。 | - | - | ||
| 上清液 | 400 | 400 | - | - |
| 0.078μmol/mL標準液 | - | - | 400 | - |
| 試劑三 | 80 | 80 | 80 | 80 |
| 試劑四 | 60 | 60 | 60 | 60 |
| 蒸餾水 | 460 | 460 | 460 | 460 |
混勻，室溫放置30min，630nm處讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。標準管與空白管只需測1-2次。
注意事項：
當測定吸光值大于0.7時，建議將上清液用蒸餾水進一步稀釋后測量。計算時乘以稀釋倍數。
離心后若上清液仍含有少量雜質，可將上清液再次10000g，常溫離心10min去除。
實驗實例：
稱取兩管0.1g土樣，分別為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測定吸光值。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.552-0.116=0.436，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.216-0.005=0.211，計算酶活得：
S-GLS（U/g 土樣）=1.872×ΔA測定÷ΔA標準÷W=1.872×0.436÷0.211÷0.1=38.682 U/g 土樣。
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