UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號: BC3365
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加15 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存可保存4周，禁止反復(fù)凍融。

2. 試劑二：臨用前加1.25 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后2-8℃保存2周。

3. 試劑三：臨用前加0.7mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃可保存4周，禁止反復(fù)凍融。

4. 試劑四：臨用前每支加1 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃可保存2周，禁止反復(fù)凍融。

5. 工作液的配制：將試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五：試劑六按體積比=600：100：20：40：100：250混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9）在自然界廣泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和動物中主要活化酶的形式，作為葡萄糖基供體參與糖原、蔗糖、纖維素等的合成代謝。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的變化來反應(yīng)。  



注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

• 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接檢測。

二、測定步驟

1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表：

注意事項(xiàng)：

1. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

2. A大于0.6或者A2測定大于1.5時(shí)，建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí)，可以延長反應(yīng)時(shí)間（5min或10min）來測定。

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