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專家解析單細(xì)胞分析技術(shù):簡(jiǎn)單的染色成像方法

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來(lái)自東京大學(xué)干細(xì)胞生物學(xué)與再生醫(yī)學(xué)研究室Hiromitsu Nakauchi教授希望能了解干細(xì)胞增殖和重編程過(guò)程中的分子級(jí)聯(lián)信號(hào),因此他分析了造血干細(xì)胞中蛋白磷酸化造成的影響。
在這項(xiàng)研究中,Nakauchi教授采用了一種簡(jiǎn)單的免疫染色技術(shù):?jiǎn)渭?xì)胞磷酸成像分析(single-cell imaging of phosphorylation assay,SCIPhos)。先將大約50個(gè)細(xì)胞想排列在載玻片上,然后進(jìn)行染色,通過(guò)共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察,通過(guò)這些染色了的磷酸化修飾蛋白,Nakauchi教授可以了解哪些蛋白處于活性狀態(tài),哪些蛋白失活了,以及這些蛋白的位置。Nakauchi教授說(shuō),“我的一些學(xué)生也利用這個(gè)方法來(lái)做Western Blotting”。
這種SCIPhos方法的優(yōu)點(diǎn)就是不僅僅能觀察磷酸化蛋白,而且能分析蛋白的位置,這有利于揭示關(guān)鍵的生物信息。缺點(diǎn)就是每個(gè)細(xì)胞需要單個(gè)成像,如果需要處理上千個(gè)細(xì)胞,那就是一個(gè)繁重的實(shí)驗(yàn)了。因此這個(gè)方法比較合適分析少量的細(xì)胞,其中的小技巧就是要多注意防止水分蒸發(fā),Nakauchi教授就是采用的在細(xì)胞液滴的周圍,用阻水筆(water-repellent pen)繞著畫一圈,這樣液滴就不會(huì)干燥得太快。
Nakauchi教授在干細(xì)胞研究領(lǐng)域成果頗豐,比如今年其研究組曾成功的利用大鼠的iPS細(xì)胞(誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞)培育出小鼠的胰腺,這是成功的將不同種動(dòng)物的細(xì)胞生成內(nèi)臟器官的實(shí)驗(yàn)。
這項(xiàng)研究通過(guò)將大鼠的iPS細(xì)胞注入到小鼠胚球中,在缺乏胰腺的小鼠中產(chǎn)生了一個(gè)具有功能的大鼠胰腺,這為再生醫(yī)療治療糖尿病開辟了一條新路。
一般的情況下,動(dòng)物的受精卵經(jīng)過(guò)反復(fù)的細(xì)胞分裂生成生物體的各個(gè)內(nèi)臟器官,而研究人員卻改變了這一過(guò)程:他們令已被改變遺傳基因的雌、雄小鼠進(jìn)行交配,得到無(wú)法自主生成胰臟的小鼠受精卵。三天后,他們又將從大鼠的尾巴中提取的1015個(gè)iPS細(xì)胞注入已經(jīng)分裂成胚胎的小鼠受精卵中,終培育出一只擁有大鼠胰臟的小鼠。
研究人員進(jìn)行了大約150只小鼠實(shí)驗(yàn),但只得到了一只成年小鼠。研究結(jié)果表明這只小鼠擁有與大鼠相同的胰臟細(xì)胞,血糖值也保持正常。目前使用誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞開展的再生醫(yī)療研究主要集中在對(duì)臟器和組織的修復(fù)上,雖然通過(guò)這種干細(xì)胞在體內(nèi)培育器官的研究尚處起步階段,但相關(guān)研究成果為再生醫(yī)療領(lǐng)域的研究帶來(lái)了新希望。
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