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瓊脂糖凝膠電泳步驟

更新時(shí)間:2025-09-24點(diǎn)擊次數(shù):940

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳最主要區(qū)別是:它兼有“分子篩"和“電泳"的雙重作用。瓊脂糖凝膠電泳中使用的溴化乙錠(EB)為中度毒性、強(qiáng)致癌性物質(zhì),務(wù)必小心。所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要嚴(yán)格按照瓊脂糖凝膠電泳步驟操作。下面我們總結(jié)瓊脂糖凝膠電泳步驟,僅供參考。

1、按所分離的DNA分子的大小范圍,稱取適量的瓊脂糖粉末,放到一錐形瓶中,加入適量的0.5×TBE電泳緩沖液。然后置微波爐加熱至充分溶化,溶液透明。稍搖勻,得膠液。冷卻至60℃左右,在膠液內(nèi)加入適量的溴化乙錠至濃度為0.5μg/ml。

2、取有機(jī)玻璃制膠板槽,有透明膠帶沿膠槽四周封嚴(yán),并滴加少量的膠液封好膠帶與膠槽之間的縫隙。

3、水平放置膠槽,在一端插好梳子,在槽內(nèi)緩慢倒入已冷至60℃左右的膠液,使之形成均勻水平的膠面。

4、.待膠凝固后,小心拔起梳子,撕下透明膠帶,使加樣孔端置陰極段放進(jìn)電泳槽內(nèi)。

5、在槽內(nèi)加入0.5×TBE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過(guò)膠面

6、把待檢測(cè)的樣品,按以下量在潔凈載玻片上小心混勻,用移液槍加至凝膠的加樣孔中。1μl加樣緩沖液(6×)+5μl待測(cè)DNA樣品〔+0.5μlEB 液(10mg/ml)(注:若膠內(nèi)未加EB,可選用此法)?!?/p>

7、接通電泳儀和電泳槽,并接通電源,調(diào)節(jié)穩(wěn)壓輸出,電壓最高不超過(guò)5V/cm,開(kāi)始電泳。點(diǎn)樣端放陰極-端。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)調(diào)節(jié)電壓使分帶清晰。

8、觀察溴酚蘭的帶(藍(lán)色)的移動(dòng)。當(dāng)其移動(dòng)至距膠板前沿約1cm處,可停止電泳。

9、染色:把膠槽取出,小心滑出膠塊,水平放置于一張保鮮膜或其他支持物上,放進(jìn)EB溶液中進(jìn)行染色,充分浸泡約30min。

10、在紫外透視儀的樣品臺(tái)上重新鋪上一張保鮮膜,趕去氣泡平鋪,然后把已染色的凝膠放在上面。關(guān)上樣品室外門,打開(kāi)紫外燈(360nm或254nm),通過(guò)觀察孔進(jìn)行觀察。

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