磷酸化蛋白提取試劑盒的使用說明

更新時間：2022-11-26

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　　磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。磷酸化蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

　　操作方法：

　　1、組織總蛋白的提取

　　(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的***酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF混勻，放置在冰上備用;

　　(2)稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作;

　　(3)將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 ℃ 12000g 離心30min;

　　(4)吸取上清至新的管中;

　　(5)進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

　　2、細胞總蛋白的提取

　　(1)裂解液的用量:107個細胞需要裂解液1ml;

　　(2)貼壁細胞:棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS 洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液;在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min;

　　(3)懸浮細胞:4℃ 400g 離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次;

　　(4)裂解完畢之后，將細胞裂解液4℃12000g離心30min;