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教你成為平淡無奇的WB實(shí)驗(yàn)小能手—常見問題篇

Weaternblot原理蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot，WB）又稱為免疫印跡（Immunoblot），其是利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）將樣品中分子量大小不同的蛋白分開，然后通過電轉(zhuǎn)移的方法將凝膠中的蛋白幾乎原位、定量地遷移、固定到固相膜上，再利用抗原、抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)以及特殊的抗體標(biāo)記技術(shù)，進(jìn)而對(duì)目的蛋白進(jìn)行定性、相對(duì)定量檢測的技術(shù)。常見問題Q蛋白提取后可以存放多久？A：蛋白提取后-80℃可保存一年。建議分裝保存，避免反復(fù)凍融。Q蛋白提取時(shí)用進(jìn)行...

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您了解醋酸辛酯嗎？

醋酸辛酯為無色透明液體，熔點(diǎn)-38.5℃，沸點(diǎn)210℃，相對(duì)密度0.8705（20/4℃），折光率1.4190，閃點(diǎn)86℃。溶于醇、醚，微溶于水。別名是：乙酸辛基酯;乙酸正辛酯;醋酸-2-乙基己酯;乙酸辛酯。醋酸辛酯的生產(chǎn)方法:工業(yè)上，由辛醇與乙酸酯化而得。將32.5kg辛醇、16kg乙酸、19kg苯和250g硫酸攪拌均勻。加熱進(jìn)行酯化?；厥毡郊s13kg后，冷至30℃以下，用5%的碳酸鈉溶液洗去酸性，再用水洗。用無水碳酸鈉干燥24h以上，然后進(jìn)行分餾，收集210-215℃餾分...

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教你成為平淡無奇的WB實(shí)驗(yàn)小能手—樣本制備篇

WB實(shí)驗(yàn)流程樣本制備的步驟關(guān)于樣本采集和保存，蛋白提取的相關(guān)知識(shí)和技巧請查看：接下來，讓小編帶您總結(jié)關(guān)于蛋白定量和蛋白變性相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)：一蛋白定量測定蛋白常用的方法有Bicinchoninicacid(BCA)法、Lowry法和Bradford法（考染法）1.BCA法的測定原理是蛋白質(zhì)將銅離子還原成亞銅離子，后者在堿性溶液中與BCA結(jié)合生成紫紅色結(jié)合物，該復(fù)合物在562nm處有吸光值且與蛋白質(zhì)濃度成正相關(guān)性，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。考馬斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色，大光吸收在488...

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定位重塑型納米凝膠介導(dǎo)共遞送抗血管藥物和自噬抑制劑實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的協(xié)同治療

腫瘤是一種復(fù)雜難治的疾病，對(duì)人類健康存在重大威脅。當(dāng)腫瘤體積超過2-3mm3時(shí)，腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移與擴(kuò)散主要依靠自身的血管系統(tǒng)來提供必要的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。而在缺乏血管的情況下，腫瘤具有自限性生長的特點(diǎn)。因此，將腫瘤血管作為靶點(diǎn)，抑制它的形成或破壞其存在，直接切斷腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)通道，是一個(gè)有吸引力的治療策略。目前，根據(jù)作用機(jī)制的不同，血管靶向藥物（VTAs）主要包括兩大類：血管生成抑制劑（AIs）和血管阻斷劑（VDAs）。在VDAs中，康普瑞汀（CA4）作為常用的小分子血管...

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一種增強(qiáng)單細(xì)胞免疫印跡檢測的光敏水凝膠

單細(xì)胞蛋白分析是一條可以更深入的了解免疫應(yīng)答、信號(hào)傳導(dǎo)、靶向治療的途徑。微流控芯片和免疫分析的出現(xiàn)為單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)的研究提供了新平臺(tái)。單細(xì)胞免疫印跡法（scWB）是一種可對(duì)單細(xì)胞表面、胞內(nèi)和核內(nèi)蛋白質(zhì)進(jìn)行多重檢測的方法。它結(jié)合了基于微芯片的十二烷基*-聚丙烯酰胺凝膠電泳方法（SDS-PAGE）和凝膠內(nèi)蛋白質(zhì)光捕獲及免疫探針方法。然而，由于原位免疫印跡的特殊性，scWB常常無法檢測低豐度的蛋白質(zhì)。凝膠內(nèi)免疫探測的成功在很大程度上取決于蛋白質(zhì)的固定化效率。目前，一種典型的光親和...

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磁珠核酸提取試劑的工作原理及提取優(yōu)勢分析

核酸提取試劑適用于從樣本中提取細(xì)菌、病毒、寄生蟲的基因組核酸DNA和RNA。專為96孔板自動(dòng)化平臺(tái)而設(shè)計(jì)，可幫助實(shí)驗(yàn)者顯著提升樣本提取的通量。工作原理：該試劑采用*磁珠和緩沖液系統(tǒng)，磁珠表面修飾有特殊化學(xué)基團(tuán)，在一定條件下對(duì)DNA/RNA具有很強(qiáng)的富集能力，當(dāng)條件改變時(shí)有可以可逆的釋放DNA/RNA，從而達(dá)到快速分離純化DNA/RNA的目的，并可去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。提取所得的高質(zhì)量核酸可用于PCR、RT-PCR、基因測序等系列實(shí)驗(yàn)。磁珠法核酸提取試劑的優(yōu)勢：磁珠法DNA提取是納...

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銀杏雙黃酮的檢測方法介紹

銀杏雙黃酮又叫白果雙黃酮，在室溫下穩(wěn)定，溶于丙酮，乙酸乙酯，微溶于石油醚、水。具有抑制磷脂酶A2活性，并能抑制前炎癥基因表達(dá)的影響，也可抑制慢性皮膚炎癥活性。銀杏雙黃酮是銀杏葉提取物，主要含銀杏黃酮苷。銀杏黃酮苷能擴(kuò)張腦血管，促進(jìn)腦血液循環(huán)，增加腦血流量，改善和保護(hù)腦細(xì)胞；改善缺氧細(xì)胞的能量代謝和營養(yǎng)；提高紅細(xì)胞SOD活性，抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化；抗血小板凝集，防止血栓形成；擴(kuò)張冠脈血管，增加冠脈循環(huán)血流量，緩解血管的痙攣。銀杏雙黃酮的檢測方法有下面2種：（1）TLC檢測方法：...

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敲黑板！這些免疫組化FAQ助您攻破實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)

免疫組織化學(xué)（簡稱免疫組化）是組織化學(xué)的一種，它是利用已知的特異性抗體與抗原能特異性結(jié)合的特點(diǎn)，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等，顯示一定的顏色，并借助顯微鏡觀察其顏色的變化，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)成份或化學(xué)性質(zhì)。實(shí)驗(yàn)過程包括切片制作（固定，脫水，透明，包埋，切片，貼片，烤片），脫蠟，水化，阻斷，抗原修復(fù)，封閉，一抗孵育，二抗孵育，顯色，復(fù)染，封片，分析。IHC是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的應(yīng)用技術(shù)，應(yīng)用過程中常出現(xiàn)各種問...

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